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第一篇 分子医学实验技术概论1

第一章 分子医学实验基本要求1

第一节 实验室规章制度与操作规范1

一、实验室规章制度1

二、实验注意事项及应急处理1

三、实验室基本操作技能3

第二节 实验记录、数据处理和实验报告5

一、实验记录5

二、实验数据的处理和实验误差5

三、实验报告8

第二章 分子医学实验样品制备的原则、策略和方法9

第一节 实验样品制备的基本原则和策略9

一、实验样品制备的基本原则9

二、实验样品制备的基本策略9

第二节 常用实验样品的制备10

一、血液样品10

二、组织样品11

三、微生物样品11

四、植物样品11

第三节 生物大分子的制备11

一、生物材料的选择与预处理11

二、组织细胞的破碎11

三、抽提12

四、生物大分子的分离、纯化13

五、纯度的分析鉴定14

六、产物的浓缩、干燥14

第二篇 分子医学实验常用的技术和方法15

第三章 离心分离技术15

第一节 离心的基本原理和基本概念15

一、离心的基本原理15

二、离心的基本概念15

第二节 离心机分类和离心方法17

一、离心机分类17

二、离心方法18

第三节 离心机的使用操作20

第四章 电泳技术21

第一节 基本原理21

一、电泳的基本原理21

二、影响带电粒子在电场中泳动的因素22

第二节 电泳技术的分类23

第三节 电泳装置23

第四节 电泳结果的检测、分析和回收25

一、电泳示踪剂25

二、电泳染色剂25

三、电泳结果的检测及回收27

第五节 几种常用的电泳方法27

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳27

二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳28

三、等电聚焦电泳28

四、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳29

五、蛋白印迹30

六、DNA印迹和RNA印迹30

第五章 层析技术32

第一节 基本原理和概念32

一、层析的基本原理32

二、层析技术的基本概念32

第二节 层析技术的分类33

一、层析的分类33

二、层析洗脱与检测方法34

第三节 吸附层析34

一、吸附层析的原理34

二、吸附层析的分类35

三、固定相和流动相的选择35

四、薄层层析的制板、点样、展层和显色37

第四节 分配层析39

一、分配层析的原理39

二、纸层析40

第五节 离子交换层析44

一、离子交换层析的原理44

二、离子交换剂的类型45

三、离子交换剂的选择与应用48

四、离子交换剂的处理、再生和保存49

五、离子交换层析的操作49

第六节 凝胶层析51

一、凝胶层析的基本原理51

二、凝胶的种类和性质51

三、柱层析凝胶的选择54

四、凝胶的处理、保存和凝胶层析的操作55

第七节 亲和层析56

一、亲和层析的基本原理56

二、亲和层析载体、配体的选择和偶联56

三、亲和层析的操作58

第八节 高效液相层析59

一、高效液相层析的原理59

二、HPLC的操作及注意事项60

第六章 分光光度技术62

第一节 分光光度技术原理62

一、基本原理62

二、Lambert-Beer定律63

三、分光光度技术的定量方法63

第二节 分光光度计的基本结构及使用64

一、分光光度计的基本结构64

二、几种常用分光光度计65

第七章PCR技术67

第一节PCR的原理及影响因素67

一、PCR的原理67

二、PCR的反应体系及主要影响因素67

第二节PCR技术的应用69

一、逆转录PCR69

二、单链构象多态性PCR70

三、限制性片段长度多态性PCR70

四、等位基因特异扩增法70

第三篇 实验项目71

第八章 蛋白质与酶学实验项目71

第一节 概述71

一、蛋白质的分子组成、结构及理化性质71

二、蛋白质的分离和纯化71

三、蛋白质的定量71

四、蛋白质纯度的鉴定72

五、蛋白质生物活性的测定72

第二节 实验项目72

实验一 生物样本中蛋白质的提取72

实验1-1组织细胞中蛋白质的提取72

实验1-2细菌细胞中蛋白质的提取74

实验二 蛋白质含量的测定75

实验2-1 Kjeldahl定氮法测定蛋白质的浓度75

实验2-2 Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质的浓度78

实验2-3考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度79

实验2-4紫外吸收法测定蛋白质的浓度80

实验2-5 BCA法测定蛋白质的浓度80

实验三 蛋白质的电泳分离82

实验3-1聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质82

实验3-2 SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量86

实验四 蛋白质印迹技术91

实验五 等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点94

实验六 层析技术（凝胶过滤、离子交换、亲和层析、HPLC）97

实验6-1凝胶层析法分离血红蛋白和DNP-鱼精蛋白97

实验6-2分子筛层析测定蛋白质相对分子质量100

实验6-3离子交换层析分离混合氨基酸103

实验6-4薄层层析分离脂类105

实验6-5纸层析法验证转氨基作用106

实验6-6高效液相层析分离蛋白质108

实验6-7亲和层析纯化植物凝集素及凝集素活性鉴定113

实验七 底物浓度对酶促反应速度的影响——酸性磷酸酶Km及Vm值测定117

第九章 流式细胞技术123

第一节 概述123

一、流式细胞术的基本原理123

二、流式细胞术的应用123

三、流式细胞仪操作规程125

第二节 实验项目126

实验八 用质控血检测T淋巴细胞亚群126

实验九 细胞凋亡的流式实验测定130

第十章 核酸和染色体实验133

第一节 概述133

一、核酸的分子组成与结构133

二、核酸的理化性质134

三、核酸的制备和含量测定135

第二节 实验项目136

实验十DNA的提取136

实验10-1真核生物组织细胞基因组DNA的提取136

实验10-2真核生物血液标本中DNA的提取138

实验10-3质粒DNA的提取139

实验十一DNA含量和纯度的测定142

实验11-1二苯胺显色法测定DNA含量142

实验11-2 紫外吸收法测定基因组DNA的含量及纯度143

实验十二RNA的制备144

实验12-1一步法提取RNA144

实验12-2 Trizol Reagent一步法提取RNA145

实验十三 地衣酚法测定RNA含量147

实验十四 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）148

实验14-1一步法RT-PCR149

实验14-2两步法RT-PCR150

实验十五 电泳法分离RNA和DNA151

实验15-1琼脂糖凝胶电泳分离DNA152

实验15-2 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离RNA155

实验十六 人类外周血染色体标本制备157

实验十七 人类染色体G带标本制备及观察162

实验十八 人类染色体核型分析164

实验十九 遗传病基因突变检测分析167

实验19-1 Duchenne型肌营养不良症DMD基因检测167

实验19-2遗传病基因突变分析169

实验二十 基因多态性的检测175

实验20-1 PCR-RFLP法测定CYP2C19m1等位基因175

实验20-2等位基因特异扩增法分析基因中单碱基突变177

第十一章 物质代谢与激素调节180

第一节 概述180

一、物质代谢的概念180

二、物质代谢研究的材料与方法180

第二节 实验项目181

实验二十一 胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响181

实验二十二Nelson-Somogyi法测定血糖浓度182

实验二十三 饱食、饥饿及激素对肝糖原含量的影响184

实验二十四 血清谷丙转氨酶活性的测定（赖氏法）186

第十二章 自主创新性实验188

第一节 概述188

一、自主创新性实验的分类188

二、自主创新性实验项目设计需要考虑或注意的问题188

第二节 自主创新性实验设计189

一、基本程序189

二、实验设计的基本思路189

附录191

一、常用数据表191

表1调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25 ℃）191

表2蛋白质等电点参考值192

表3常见蛋白质相对分子质量参考值193

表4核酸、蛋白质换算数据194

表5 SDS-PAGE分离胶配方表195

二、常用试剂的配制196

三、缓冲溶液及配制199

四、透析袋的处理与保存212

参考文献213