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绪论1

一、细胞的发现1

二、细胞培养发展简史2

三、本教材使用说明3

四、细胞培养技术的学习方法4

第一章　细胞培养的基本条件7

第一节　细胞培养实验室的建立7

一、细胞培养实验室设计原则与要求7

二、细胞培养实验室的布局7

三、细胞培养实验室的基本设备10

第二节　培养仪器和材料12

一、常用仪器设备12

二、培养器皿与其他材料15

三、培养器皿的清洗和消毒17

第三节　细胞培养用液24

一、培养基24

二、清洗液37

三、消化液39

四、培养用液的灭菌与保存39

第二章　细胞培养的基本原理和技术43

第一节　细胞培养的基本原理43

一、细胞培养的基本概念43

二、培养细胞的生物学44

第二节　细胞培养的准备和基本程序49

一、细胞培养前的准备49

二、细胞培养的基本程序与技术50

第三节　细胞活性和增殖的检测55

一、细胞活性的检测55

二、细胞增殖的检测57

第四节　细胞的冻存、复苏和运输63

一、细胞的冻存63

二、细胞的复苏64

三、细胞的运输65

第五节　细胞培养物污染的检测和排除66

一、污染因素和预防措施66

二、污染的检测68

三、微生物污染的排除72

第六节　显微观察和流式细胞术73

一、相差显微镜74

二、荧光显微镜75

三、激光扫描共焦显微镜78

四、流式细胞仪80

第三章　上皮细胞及其干细胞的培养84

第一节　内皮细胞和内皮祖细胞84

一、血管内皮细胞84

二、微血管内皮细胞88

三、淋巴管内皮细胞91

四、内皮祖细胞95

第二节 胃和肠的上皮细胞99

第三节　呼吸道上皮细胞101

一、气管和支气管上皮细胞102

二、Ⅱ型肺泡细胞105

第四节　表皮细胞和表皮干细胞107

一、角质形成细胞107

二、表皮干细胞108

三、毛囊干细胞110

第五节　乳腺上皮细胞113

第四章 结缔组织细胞及其干细胞的培养116

第一节　固有结缔组织细胞116

一、成纤维细胞116

二、巨噬细胞119

三、肥大细胞122

四、脂肪细胞126

五、脂肪干细胞128

第二节　软骨细胞和成骨细胞129

一、软骨细胞129

二、成骨细胞133

第三节　单核细胞和淋巴细胞135

一、单核细胞135

二、淋巴细胞136

第四节　树突状细胞138

一、外周血中的树突状细胞138

二、骨髓中的树突状细胞140

第五章　肌细胞及其干细胞的培养142

第一节　平滑肌细胞142

一、血管平滑肌细胞142

二、胃肠平滑肌细胞145

第二节　骨骼肌成肌细胞147

一、鸟类骨骼肌成肌细胞147

二、啮齿类骨骼肌成肌细胞148

三、人骨骼肌细胞149

第三节　心肌细胞150

一、幼年和胚胎心肌细胞150

二、成年心肌细胞154

第四节　心肌干细胞157

一、心脏内的心肌干细胞157

二、骨髓中的心肌干细胞158

第六章　神经组织细胞和神经干细胞的培养161

第一节　神经元161

第二节　神经胶质细胞163

一、星形胶质细胞163

二、少突胶质细胞164

三、施万细胞166

第三节　神经干细胞169

第七章 骨髓间充质干细胞的培养及其诱导分化172

第一节　骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定172

一、贴壁培养法172

二、密度梯度离心法174

三、骨髓间充质干细胞的鉴定175

第二节　骨髓间充质干细胞的诱导分化177

一、向软骨和骨细胞的诱导分化177

二、向心肌细胞和内皮细胞的诱导分化181

三、向神经细胞的诱导分化184

第八章　胚胎干细胞的培养及其诱导分化187

第一节　小鼠胚胎干细胞的分离、培养与鉴定187

一、小鼠胚胎干细胞的分离与培养187

二、小鼠胚胎干细胞的鉴定193

第二节 山羊胚胎干细胞的分离、培养与鉴定199

一、山羊胚胎干细胞的分离与培养199

二、山羊ES样细胞的鉴定202

第三节　人胚胎干细胞的分离、培养与鉴定204

一、人胚胎干细胞的分离与培养204

二、人胚胎干细胞的鉴定207

第四节　胚胎干细胞的诱导分化208

一、胚胎干细胞诱导分化的基本策略及理论实践208

二、胚胎干细胞向肝细胞的诱导分化209

三、胚胎干细胞向神经前体细胞和终末细胞的诱导分化211

四、胚胎干细胞向造血细胞的诱导分化213

五、胚胎干细胞向其他类型细胞的诱导分化215

第五节　胚胎干细胞系的建立与应用216

一、胚胎干细胞系的建立216

二、胚胎干细胞系的应用217

三、胚胎干细胞研究与应用中存在的主要问题219

第九章　肿瘤细胞和肿瘤干细胞的培养220

第一节　实体肿瘤220

一、肝癌细胞221

二、胃癌细胞225

三、肺癌细胞227

四、乳腺癌细胞230

五、卵巢癌细胞233

第二节　血液肿瘤235

第三节　肿瘤干细胞237

一、肿瘤干细胞的分离和纯化237

二、肿瘤干细胞的鉴定242

第四节　肿瘤细胞系的鉴定243

一、肿瘤细胞系的共同特征243

二、人肿瘤细胞系的个别特性245

三、细胞系污染的鉴定246

第十章　培养细胞的相关生物学检测技术249

第一节　细胞衰老与凋亡的检测249

一、细胞衰老的检测249

二、细胞凋亡的检测254

第二节　细胞周期分析方法263

第三节　细胞同步化方法264

一、振荡分离法264

二、低温培养法265

三、血清饥饿法265

四、两次阻滞法266

五、细胞同步化检测267

第四节　细胞迁移实验268

一、细胞刮除法268

三、细胞培养池法269

第十一章　培养细胞的遗传学与分子生物学检测272

第一节　培养细胞的遗传学检测272

一、基因突变检测272

二、染色体畸变分析278

三、微核检测282

第二节　培养细胞的分子生物学检测285

一、培养细胞的DNA检测286

二、培养细胞的RNA检测288

三、培养细胞的蛋白质检测290

四、分子生物学检测新技术介绍292

第十二章　细胞培养技术的应用294

第一节　体外细胞培养模型的建立与应用294

一、细胞共培养模型的建立与应用294

二、细胞外基质凝胶模型的建立与应用296

三、生物材料的组织工程技术与应用298

第二节　杂交瘤单克隆抗体技术299

一、抗原的准备和动物免疫300

二、杂交瘤制备305

三、杂交瘤细胞株筛选308

四、杂交瘤细胞株的亚克隆309

第三节　培养细胞的基因导入技术310

一、基因导入的基本原理310

二、基因组功能研究中的基因导入311

三、转基因动物中的基因导入311

四、基因治疗中的基因导入315

五、基因导入在其他领域中的应用316

第四节　培养细胞的核移植技术及其应用317

一、核移植技术的原理与方法317

二、核移植技术的实际应用324

英文缩写326

中文索引331