荧光原位杂交技术PDF|Epub|txt|kindle电子书版本网盘下载

荧光原位杂交技术PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

第一章 概述1

参考文献4

第二章 FISH 探针和标记技术5

1 概述5

2 荧光素发光原理5

荧光素和半抗原6

常用的荧光素7

滤光片的选择8

3 核酸探针8

探针类型8

探针克隆的制备9

酶促扩增探针15

合成寡核苷酸探针17

4 荧光素或半抗原与核苷酸的结合17

5 探针标记20

缺口平移20

随机引物标记22

RNA 转录标记23

PCR 标记25

6 DNA 标记后的处理和纯化26

DNA 酶处理(适用于 FISH 和其他杂交方法)26

荧光素、半抗原与蛋白质的直接化学结合27

其他化学结合系统27

探针沉淀之前反应混合体系中未结合的核苷酸与 BSA 的去除27

荧光素或半抗原与氨基修饰的核苷酸的结合27

7 其他标记系统27

参考文献29

第三章 单拷贝基因的人类染色体定位30

1 概述30

2 用于 FISH 定位的 DNA 探针30

网站上 FISH 探针的选择鉴别30

FISH 定位探针制备33

中期染色体35

3 靶 DNA 制备35

间期核定位38

低渗处理和固定39

4 样本的准备40

靶玻片的预处理42

5 探针和靶 DNA 的变性和杂交43

6 杂交后洗涤45

7 免疫检测46

8 染色体复染和显带48

9 显微镜和图像分析49

中期染色体单探针的 FISH 定位50

10 FISH 定位过程中应该考虑的要点50

多探针的相关定位51

参考文献54

第四章 鼠染色体制备57

1 用于显带和原位杂交鼠染色体的制备57

概述57

2 鼠染色体姬姆萨-胰蛋白酶显带64

3 鼠染色体分子细胞遗传学研究方法66

参考文献76

第五章 使用染色质和 DNA 纤维的高分辨率 FISH 定位78

1 概述78

4 染色质纤维制备79

2 染色质纤维制备中的实际问题79

3 染色质纤维 FISH 所需的常规设备79

5 DNA 纤维制备84

6 FISH86

DNA 探针标记86

杂交88

洗涤90

检测与扩增91

复染和抗褪色92

7 照相93

参考文献94

第六章 RNA FISH 技术在观察基因表达和核结构中的应用96

1 概述96

2 细胞制备98

清洗剂抽提细胞样本99

细胞遗传学准备100

3 探针制备101

4 与 RNA 杂交103

RNA 杂交基本程序104

寡核苷酸杂交105

5 与 DNA 杂交106

检测热变性的细胞 DNA107

应用 NaOH 变性和 RNA 水解的 DNA FISH108

6 多重标记技术及其应用108

RNA 和 DNA 的同时检测108

应用 FISH 同时检测蛋白质109

染色体着色和 RNA FISH111

用内含子和 cDNA 探针区分转录产物112

外显子抑制杂交：特异竞争应用实例113

7 观察分析结果116

显微镜116

数码图像117

8 结语119

参考文献120

第七章 三维核 FISH122

1 概述122

2 细胞的制备和固定126

载玻片的准备126

贴壁细胞的培养和固定128

悬浮细胞的制备、贴壁和固定129

3 外周血细胞的分离130

4 杂交前预处理131

探针标记134

5 建立杂交体系134

探针制备135

DNA 变性与杂交135

6 杂交后洗涤，检测，核复染和封片137

杂交后洗涤137

杂交探针检测137

核复染及抗褪色介质中封固细胞141

7 3D FISH 和复制标记142

复制标记142

FISH 操作后卤化脱氧尿嘧啶核苷酸的检测143

8 蛋白质免疫检测与3D FISH 联合应用145

9 3D FISH 过程中染色质结构的保持146

10 共聚焦显微镜148

滤光片的选择149

采图条件151

仪器校订152

显示153

计量和去折叠155

参考文献158

第八章 分裂中期染色体和 DNA 芯片的比较基因组杂交161

1 概述161

3 基因组 DNA 的分离163

2 中期染色体的制备163

4 单细胞群分离的显微操作169

5 通用 PCR 对小细胞群基因组 DNA 的扩增170

6 探针标记173

7 比较基因组杂交176

中期染色体变性176

探针混合物177

原位杂交和信号检测178

8 图像采集与评价179

9 CGH 实验中一些问题的解决方法180

11 新进展：阵列 CGH181

10 CGH 实验与通用 PCR 联合应用时所遇问题的解决方法181

参考文献183

第九章 FISH 在临床细胞遗传学中的应用185

1 概述185

2 临床实验中常用的 FISH 探针185

3 用于 FISH 分析的临床样本制备186

用于 FISH 分析中期染色体的制备187

FISH 分析临床样本间期细胞核的制备189

4 评价和报告 FISH 结果的标准195

间期 FISH 信号评价和计数标准196

显微镜下挑选细胞进行 FISH 的注意事项196

关于间期 FISH 结果解释的注意事项198

5 临床细胞遗传学中常用的一些 FISH 探针198

微缺失综合征的 FISH 分析198

三色融合(易位/倒位)探针的使用200

FISH 探针在评价基因扩增中的应用202

6 附录(分子细胞遗传学临床资源的相关网站)203

参考文献203

第十章 多色 FISH 和光谱核型分析205

1 概述205

2 光谱核型分析(SKY)206

3 M-FISH206

4 M-FISH 及 SKY 的方法和步骤208

5 图像采集和分析的注意事项214

SKY 图像分析215

M-FISH 图像分析215

6 解决问题的方法216

参考文献218

第十一章 应用 cDNA 微阵列进行基因表达的荧光杂交分析222

1 概述222

基因表达序列分析222

寡核苷酸芯片222

2 cDNA 芯片的制备223

cDNA 芯片223

培养 cDNA 细菌克隆225

芯片点样231

3 靶产品232

4 杂交236

5 图像采集237

6 图像分析和标准化238

7 敏感性与特异性239

8 数据处理与统计学分析239

9 小结239

参考文献240

供应商目录242