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目录1

第一章 绪论1

第一节 动物细胞培养技术的发展历史1

一、动物细胞培养技术应用的起始阶段1

二、动物细胞培养技术的应用过程2

三、动物细胞培养技术的产业化阶段3

第二节 动物细胞培养技术的实际应用4

一、生产天然药用蛋白4

二、基因重组蛋白的临床应用5

三、制备单克隆抗体6

四、对环境和动物保护的作用6

五、新药研发7

第三节 动物细胞培养技术的发展方向8

一、临床生物治疗8

二、疫苗研制8

三、药理检测模型9

参考文献9

第二章 动物细胞培养技术的基本理论10

一、贴附生长11

第一节 动物细胞的生长特征11

二、生长的接触抑制及密度依赖性12

第二节 动物细胞的增殖过程12

一、潜伏期13

二、对数生长期13

三、稳定期13

一、培养细胞的生长方式14

二、细胞培养的条件14

第三节 动物细胞体外培养的生长方式和条件14

四、衰亡期14

三、微载体培养技术在动物细胞培养中的应用22

第四节 细胞系建立、保存和鉴定24

一、基本概念24

二、建立细胞系（株）的档案25

三、细胞系的鉴定25

四、细胞系（株）的保藏26

第五节 动物细胞培养的放大技术与生物反应器26

一、细胞培养规模的放大26

二、动物细胞培养用生物反应器27

三、培养过程监控30

参考文献31

四、结语31

第三章 动物细胞培养在单克隆抗体制备中的应用33

第一节 杂交瘤技术的基本原理和过程33

一、小鼠体系33

二、大鼠体系45

三、人体系47

第二节 杂交瘤细胞高密度无血清悬浮培养技术49

一、影响杂交瘤细胞体外培养的主要因素49

二、动物细胞大规模培养操作方法52

三、动物细胞培养生物反应器54

四、动物细胞的微囊化培养55

五、杂交瘤细胞大规模培养生产抗体56

第三节 单克隆抗体的分离纯化57

一、鼠腹水中单克隆抗体的初步纯化57

二、细胞培养液中单克隆抗体的浓缩58

三、亲和色谱纯化抗体59

四、离子交换色谱纯化抗体62

五、凝胶过滤色谱纯化抗体66

六、高纯度单克隆抗体纯化方案设计68

一、体外应用69

第四节 单克隆抗体的应用69

二、体内应用71

参考文献78

第四章 外源基因在动物细胞中的表达与产物纯化80

第一节 动物宿主细胞80

四、MDCK细胞81

五、Namalwa细胞81

六、Vero细胞81

三、C127细胞81

二、CHO-K1细胞81

一、BHK-21细胞81

七、鼠骨髓瘤细胞82

八、COS细胞82

第二节 动物细胞的基因转染技术82

一、光穿孔法83

二、冲击波法84

三、基因枪法84

四、电穿孔法84

五、磷酸钙共沉淀法84

六、脂质体法84

一、表达载体与宿主细胞85

第三节 蛋白表达条件的优化85

八、其他85

七、抗体转染法85

二、改变重组工程细胞特性，延长培养周期93

三、重组工程细胞培养工艺的优化95

第四节 动物细胞表达的基因重组蛋白的分离纯化96

一、动物细胞生产的基因重组蛋白的性质97

二、下游纯化过程简介97

三、下游纯化工艺的设计98

四、细胞分离99

五、精制步骤105

一、去除杂蛋白106

六、问题106

第五节 动物细胞培养和纯化过程中生物污染物的控制106

二、去除微生物，保持无菌状态107

参考文献111

第五章 动物细胞培养法生产疫苗112

第一节 疫苗发展历程112

一、疫苗的历史112

二、疫苗的分类112

三、人用疫苗的发展趋势113

四、兽用疫苗现状115

五、疫苗接种的意义116

六、目前国内应用疫苗的种类和简介117

第二节 疫苗制品纯化技术119

一、细胞破碎119

二、离心沉降技术120

三、膜分离技术121

四、凝胶过滤技术122

五、离子交换色谱123

六、疫苗制备过程中纯化技术的实际应用124

一、森林脑炎疫苗制造125

第三节 动物细胞培养技术在疫苗生产中的应用125

二、流行性乙型脑炎灭活疫苗制造127

三、口服脊髓灰质炎活疫苗制造129

四、人用浓缩狂犬病疫苗制造130

五、冻干麻疹活疫苗制造131

六、冻干流行性腮腺炎活疫苗制造134

七、细胞生物反应器微载体培养草鱼出血病疫苗136

八、二次细胞技术在疫苗生产上的应用136

九、同批次细胞基质收获甲肝和麻疹病毒制备联合疫苗的方法137

十、同时感染法制备甲肝（LA1）减毒活疫苗137

参考文献138

十一、管道化生产CHO细胞重组乙肝疫苗138

第一节 概述140

第六章 动物细胞培养法生产基因重组蛋白药物140

第二节 哺乳动物细胞培养生产基因重组蛋白药物142

一、基因重组蛋白药物在哺乳动物细胞表达的基本步骤143

二、哺乳动物细胞的大规模培养144

三、用哺乳动物细胞生产的基因重组蛋白药物150

第三节 昆虫细胞生产基因重组蛋白药物153

二、昆虫细胞系中常用的表达载体154

三、稳定转染昆虫细胞系的繁殖和表达154

一、常用的昆虫细胞系154

四、稳定转染细胞表达外源蛋白155

参考文献155

第七章 动物细胞培养在组织工程中的应用157

第一节 组织工程化生物反应器——人工肝157

一、肝细胞的来源158

二、生物人工肝系统中反应器159

第二节 皮肤组织工程细胞和组织工程化皮肤162

一、皮肤组织工程细胞162

二、组织工程化皮肤164

第三节 组织工程技术在骨缺损修复中的应用167

三、展望167

一、骨组织工程研究进展168

二、骨髓基质干细胞的定向诱导分化169

三、细胞型骨组织工程技术修复骨缺损171

参考文献172

第八章 细胞培养技术在SARS研究中的应用174

一、SARS病毒简介174

二、细胞培养在SARS病毒鉴定和检测中的应用174

三、组织细胞培养在抗SARS药物研制中的应用175

参考文献177

第九章 树突状细胞的制备技术178

一、外周血树突状细胞的分离178

二、小鼠髓源性树突状细胞的制备182

三、从小鼠胸腺前体细胞诱生树突状细胞185

四、人树突状细胞的体外诱导分化189

五、从纯化的CD14+单核细胞诱生树突状细胞194

六、用于肿瘤免疫治疗的血源人树突状细胞制备201

参考文献205

附录 生物制品生产用动物细胞制备及检定规程208