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绪论1

第1章 光谱分析技术3

1.1 基本理论3

1.1.1 光分析的范畴3

1.1.2 原理3

1.1.3 光谱分析仪器5

1.2 紫外-可见吸收光谱分析9

1.2.1 概况9

1.2.2 原理10

1.2.3 光谱分析的基本概念11

1.2.4 化合物中的发色基团及助色基团13

1.2.5 紫外-可见分光光度计14

1.2.6 主要技术指标与校正17

1.2.7 紫外-可见吸收光谱应用范围19

1.2.8 紫外-可见吸收光谱分析的条件和影响因素21

1.2.9 应用实例22

1.3 分子发射光谱——荧光光度分析法25

1.3.1 概况25

1.3.2 原理25

1.3.3 激光光谱和发射光谱的关系26

1.3.4 荧光量子产率与分子结构30

1.3.5 仪器基本结构32

1.3.6 影响荧光分析的因素35

1.3.7 荧光分析方法38

1.3.8 荧光分析法的应用38

1.4 原子吸收光谱分析法39

1.4.1 概况39

1.4.2 原理40

1.4.3 原子吸收分光光度计41

1.4.4 仪器的分类44

1.4.5 原子吸收光谱分析的干扰及消除方法45

1.4.6 无火焰法背景校正46

1.4.7 原子吸收光谱的分析方法48

参考文献50

第2章 层析技术51

2.1 基本理论51

2.1.1 概况51

2.1.2 原理55

2.1.3 分离度60

2.1.4 层析对塔板高度的影响63

2.1.5 基本色谱分离方程的应用64

2.2 液相层析65

2.2.1 概况65

2.2.2 原理65

2.2.3 液相层析仪器65

2.2.4 固定相67

2.2.6 应用68

2.2.5 流动相68

2.3 吸附层析70

2.3.1 概况70

2.3.2 原理70

2.3.3 吸附介质的分离及其性质71

2.3.4 吸附层析技术75

2.3.5 分离过程75

2.3.6 应用实例76

2.4.1 概述77

2.4 离子交换层析77

2.4.2 原理78

2.4.3 离子交换层析介质79

2.4.4 常用的离子交换层析介质及其特性80

2.4.5 离子交换介质的技术指标80

2.4.6 离子交换层析技术82

2.4.7 脱曲线的分析86

2.4.8 影响离子交换层析的因素86

2.4.9 离子交换剂的处理与再生88

2.4.10 应用实例89

2.5 亲和层析技术90

2.5.1 概况90

2.5.2 原理90

2.5.3 亲和层析介质91

2.5.4 亲和层析介质的制备91

2.5.5 亲和层析技术96

2.5.6 影响亲和层析的主要因素98

2.5.7 应用实例99

2.6 排阻层析102

2.6.1 概况102

2.6.2 原理102

2.6.3 凝胶层析介质106

2.6.4 排阻层析分离条件的确定111

2.6.5 凝胶介质的后处理112

2.6.6 排阻层析的分离模式113

2.6.7 应用实例114

2.7 金属鳌合层析116

2.7.1 概况116

2.7.2 原理116

2.7.3 金属鳌合介质117

2.7.4 分离的条件选择119

2.7.5 金属鳌合层析分离技术120

2.7.6 金属鳌合层析应注意的问题121

2.7.7 应用实例122

2.8 聚焦层析123

2.8.1 概况123

2.8.2 原理124

2.8.3 聚焦层析介质125

2.8.4 缓冲液125

2.8.5 层析步骤126

2.8.7 应用实例127

2.8.6 聚焦层析注意的问题127

2.9 疏水层析128

2.9.1 概况128

2.9.2 原理128

2.9.3 疏水介质130

2.9.4 疏水层析的影响因素130

2.9.5 应用实例132

2.9.6 离子对层析133

2.10 灌注层析134

2.10.1 概况134

2.10.2 原理135

2.10.3 灌注介质135

2.10.4 影响灌注层析的因素136

2.10.5 应用实例137

参考文献137

3.1.1 概况139

3.1 基本理论139

第3章 蛋白质电泳技术139

3.1.2 常用术语140

3.1.3 原理140

3.1.4 分类142

3.1.5 电泳仪及附属设备143

3.1.6 电泳的操作模式144

3.1.7 凝胶电泳的支持介质145

3.1.8 影响电泳的环境因素152

3.1.9 染色方法153

3.2 净电荷聚丙烯酰胺凝胶电泳156

3.2.1 原理156

3.2.2 电泳的类型158

3.2.3 相关名词158

3.2.4 电泳支持介质的性质158

3.2.5 电泳条件的选择158

3.2.6 电泳方法163

3.2.7 应用实例166

3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳171

3.3.1 概况171

3.3.2 原理172

3.3.3 影响 SDS-复合物形成的主要因素175

3.3.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型175

3.3.5 电泳条件的选择176

3.3.6 低相对分子质量多肽的 SDS-PAGE177

3.3.7 生物活性的回复178

3.3.8 SDS-电泳结果处理179

3.3.9 应用实例180

3.4 等电聚焦电泳183

3.4.1 概述183

3.4.2 蛋白质等电聚焦电泳的基本原理183

3.4.4 载体两性电解质184

3.4.3 pH 梯度的产生方式184

3.4.5 电泳条件的选择186

3.4.6 应用实例190

3.5 双向电泳193

3.5.1 概述193

3.5.2 双向电泳技术194

3.5.3 双向电泳模式的选择197

3.5.4 双向电泳注意的问题197

3.5.5 应用实例198

3.6 蛋白质印迹201

3.6.1 原理201

3.6.2 蛋白质印迹条件的选择202

3.6.3 应用实例206

参考文献207

4.1.2 仪器的基本结构209

4.1.1 概况209

4.1 高效液相色谱209

第4章 微量分析技术209

4.1.3 层析柱的结构及制备技术215

4.1.4 高效液相层析的分离模式218

4.1.5 应用实例221

4.2 高效毛细管电泳222

4.2.1 概况222

4.2.2 原理226

4.2.3 毛细管电泳仪的结构227

4.2.4 电极液228

4.2.5 进样方式229

4.2.6 毛细管电泳的分离模式与应用实例229

4.3 蛋白质 N 末端氨基酸序列测定235

4.3.1 概况235

4.3.2 原理236

4.3.3 蛋白质 N 末端氨基酸测定序列仪238

4.3.4 影响序列测定的因素240

4.3.5 蛋白质序列测定应注意的问题241

4.3.6 结果分析243

4.4 蛋白质结晶技术244

4.4.1 常规结晶技术244

4.4.2 蛋白质微量结晶技术251

参考文献253

第5章 免疫学技术255

5.1 免疫学的基本概念255

5.1.1 免疫学的范畴255

5.1.2 免疫的功能255

5.1.3 免疫系统的组织结构255

5.1.4 抗原255

5.1.5 免疫球蛋白257

5.1.6 免疫佐剂260

5.1.7 免疫应答260

5.1.8 抗原抗体反应262

5.1.9 人工制备抗体的类型263

5.2 抗血清的制备264

5.2.1 原理264

5.2.2 制备方法264

5.2.3 应用实例265

5.3 抗体的纯化266

5.3.1 概况266

5.3.2 应用实例267

5.4 抗体的检测268

5.4.1 原理268

5.4.2 几种常用检测方法的原理269

5.4.3 应用实例270

5.5 酶联免疫吸附测定273

5.5.1 概况273

5.5.2 原理275

5.5.3 几种常用类型的 ELISA 测定法275

5.5.4 酶结合物276

5.5.5 实验条件281

5.5.6 应用实例283

5.5.7 注意事项284

参考文献284

第6章 离心技术286

6.1 基本理论286

6.1.1 概况286

6.1.2 原理286

6.1.3 颗粒在离心场中的沉降288

6.2 离心机293

6.2.1 概况293

6.2.2 分类293

6.2.3 基本结构294

6.2.4 转头的基本构造及其参数296

6.3.1 概况301

6.3.2 离心方法301

6.3 离心技术301

6.3.3 离心技术304

6.3.4 离心机的安全操作与保养307

参考文献308

第7章 膜分离技术309

7.1 过滤技术309

7.1.1 过滤作用309

7.1.2 过滤速度309

7.1.3 过滤装置309

7.1.4 影响因素309

7.1.5 提高过滤速度的措施310

7.2 膜分离技术310

7.2.1 概况310

7.2.2 原理310

7.2.3 膜的性质311

7.2.4 分离方式311

7.3 超滤技术312

7.3.1 原理313

7.3.2 超滤装置与工作原理313

7.3.3 几种超滤装置性能的比较314

7.3.4 分级分离314

7.3.5 中空纤维柱的选择及使用314

7.3.6 影响超滤的几个因素315

7.3.7 超滤技术的应用315

参考文献315

附录316

附录一 常用缓冲溶液的配制方法316

附录二 硫酸铵饱和度的常用计算表321

附录三 常用市售酸碱的浓度322

附录四 常用蛋白质相对分子质量标准参照物323

附录五 某些蛋白质的物理性质323

附录六 一些常见蛋白质相对分子质量参考值324

附录七 一些常见蛋白质等电点参考值325