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第一章 生物化学实验基本方法1

第一节 实验室规则1

第二节 基本实验操作1

一、玻璃仪器的清洗1

二、玻璃仪器的干燥2

三、刻度吸管的使用2

四、可调式微量移液器的使用3

五、溶液的混匀3

第三节 常用实验仪器的使用4

一、LD5-2A离心机的使用4

二、722型分光光度计的使用方法4

三、752紫外光栅分光光度计的使用方法5

二、尿液样本的收集与保存6

一、血液样本的收集与保存6

第四节 常用实验标本的制备6

三、组织样品的制备7

第五节 实验报告的书写9

第二章 生物化学基本实验技术10

第一节 分光光度技术10

一、基本原理10

二、分光光度计的结构12

三、分光光度技术的应用13

第二节 电泳技术14

一、基本原理14

二、电泳技术的分类和特点16

三、影响电泳的因素16

四、常用电泳技术17

一、基本原理19

第三节 层析技术19

二、层析法的分类20

三、离子交换层析21

四、凝胶层析25

五、亲和层析31

六、高效液相色谱35

七、分配层析36

第四节 离心技术39

一、基本原理39

二、离心机的类型40

三、制备性超速离心的分离方法41

四、离心操作的注意事项43

第五节 透析技术43

一、透析原理及影响因素43

三、透析操作及注意事项44

二、透析技术的应用44

第三章 分子生物学基本技术原理46

第一节 核酸分子杂交46

一、核酸分子杂交的基本理论46

二、核酸探针47

三、核酸探针的标记48

四、核酸分子杂交的种类与方法50

第二节 DNA克隆技术基本原理53

一、获取目的基因53

二、构建基因载体54

三、限制性核酸内切酶的作用56

四、DNA分子重组56

五、重组DNA分子导入宿主细胞57

七、克隆基因的表达58

六、阳性重组体的筛选和鉴定58

第三节 聚合酶链反应（PCR）59

一、基本原理与方法59

二、PCR技术的应用61

第四章 基本教学实验63

实验一 蛋白质的沉淀、变性及等电点的测定63

一、蛋白质的沉淀与变性63

二、蛋白质沉淀反应的分类63

三、沉淀蛋白质的主要方法63

四、蛋白质等电点的测定66

实验二 几种理化因素对酶活性的影响67

实验三 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用69

实验四 运动对尿中乳酸含量的影响71

实验五 酮体的生成和利用73

实验六 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（赖氏法）75

第五章 基本技术实验78

实验七 蛋白质的透析78

实验八 蛋白质的定量测定（一）：酚试剂法（改良Lowry法）79

实验九 蛋白质的定量测定（二）：紫外分光光度法82

实验十 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳83

实验十一 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳86

实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子质量88

实验十三 离子交换层析法分离氨基酸92

实验十四 血清HDL-胆固醇的测定94

实验十五 胡萝卜素的柱层析分离95

实验十六 细胞核的分离与纯化97

实验十七 激素对血糖浓度的影响101

一、血糖的定量测定101

第六章 综合实验101

二、胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响103

实验十八 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定105

实验十九 核酸的制备及测定108

第七章 分子克隆技术基础实验113

实验二十 DNA的琼脂糖凝胶电泳113

实验二十一 质粒DNA的提取（碱裂解法）114

实验二十二 限制性内切酶对质粒DNA的酶切作用116

实验二十三 感受态细菌的制备及质粒DNA的转化118

实验二十四 核酸的分子杂交119

实验二十五 聚合酶链反应（PCR）体外扩增DNA121

二、试剂配制的一般注意事项124

一、一般化学试剂的分级124

附录Ⅰ 化学试剂分级及注意事项124

附录 生物化学与分子生物学常用资料124

附录Ⅱ 常用缓冲液配制表125

附录Ⅲ 分子生物学实验中常用试剂的配制127

一、有机试剂的配制127

二、细菌培养基和抗生素的配制127

三、分子生物学实验中常用缓冲液的配制128

四、常用电泳缓冲液的配制129

五、常用凝胶加样缓冲液的配制129

六、常用限制性内切酶的酶切位点及其缓冲液的配制130

附录Ⅳ 溴化乙锭稀溶液（如含有0.5μg/ml的电泳缓冲液）的净化处理130

附录Ⅴ 细菌的保存130

附录Ⅵ 重铬酸洗液的配制与再生131

附录Ⅶ 常用的生物化学与分子生物学相关网站131

参考文献133