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第一章 原代神经细胞培养和细胞功能测定1

第一节 原代皮质和海马神经元培养1

第二节 新生小鼠中脑多巴胺能神经元培养3

一、单层皮质星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元3

二、单层星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元及形成神经突触9

三、本节实验中使用到的试剂和溶液11

四、注意事项13

五、常见问题及解决方案13

六、预期结果13

七、时间因素14

第三节 小鼠神经干细胞培养14

一、成年鼠神经干细胞培养14

二、新生鼠海马神经干细胞的培养19

三、胎鼠神经干细胞的培养20

第四节 原代神经胶质细胞培养21

一、星形胶质细胞的分离和培养21

二、新生鼠小胶质细胞的原代培养23

三、成年鼠小胶质细胞的分离和培养25

第五节 小胶质细胞功能实验29

一、趋化和迁移实验29

二、体外测定小胶质细胞吞噬功能（吞噬尼罗红微球／α突触核蛋白／aβ）30

第二章 模式动物行为学实验34

第一节 morris水迷宫34

第二节 y-迷宫36

第三节 小鼠平衡功能实验39

第四节 抑郁模型的建立和评定40

一、抑郁症的模型制作41

二、抑郁动物的行为学评价45

第五节 嗅觉行为功能测定47

一、埋藏食物小球实验48

二、嗅觉迷宫48

第六节 大脑中动脉闭塞模型的建立和评定49

第七节 运动功能评定52

一、小鼠肢体力量测试实验——小鼠抓力测试52

二、小鼠耐力测试实验——跑台实验53

第八节 感觉（痛触觉）系统评估54

一、von frey test54

二、智能热板仪56

三、甩尾实验57

第三章 神经病理学实验59

第一节 脑组织的取材、保存和标本制作59

第二节 脊髓组织的取材、保存和标本制作62

一、脊髓的取材和保存62

二、脊髓冰冻切片的制作64

第三节 小鼠脑脊液采集66

第四节 海马脑片场电位的神经电生理记录方法67

第五节 神经免疫组织化学和免疫荧光染色71

第六节 透视电镜标本制作74

第七节 老化组织相关病理特殊染色（sa-β-gal、银染色）77

一、神经原纤维缠结（nfts）染色77

二、β-淀粉样蛋白染色80

三、衰老相关β-半乳糖苷酶染色82

第八节 神经组织高尔基染色83

第九节 神经组织体视学分析技术86

第十节 共聚焦扫描及定量技术92

一、激光共聚焦显微镜的成像原理92

二、激光共聚焦显微镜在神经变性疾病研究中的运用93

三、激光共聚焦显微镜结构95

四、基本扫描及图像获取95

五、微分干涉差（dic）扫描及图像获取102

六、拼图扫描及图像获取103

七、z-stack扫描及图像获取103

八、时间序列扫描105

九、激光共聚焦图像定量及后处理106

第四章 神经生化和基因检测115

第一节 转基因动物的基因型鉴定、保种和管理115

一、小鼠生殖生理115

二、小鼠的生长周期116

三、基因工程鼠饲养繁殖一般流程和注意事项116

四、常用小鼠品系的概况117

五、几种常用神经变性疾病转基因鼠的介绍和鉴定118

第二节 神经组织蛋白检测125

一、蛋白质印迹法125

二、免疫共沉淀原理及步骤130

三、动物脑组织匀浆检测aβ132

第三节 rna提取及实时荧光定量pcr技术134

一、rna提取134

二、rt-pcr135

三、qpcr135

第四节 基因芯片检测140

一、单核苷酸多态性芯片实验140

二、基因表达谱芯片检测142

第五节 荧光素酶报告基因技术分析启动子转录活性143

第六节 荧光定量pcr法检测端粒酶活性146

第七节 中枢神经系统突触和非突触线粒体的分离提取148

第五章 分子影像技术检测神经变性疾病157

第一节 pet/spect-ct显像探针的制备158

第二节 fmri成像技术的原理及其实验设计与数据处理164

一、fmri实验设计164

二、实验设备166

三、实验数据处理166

四、fmri实验相关的准备169

五、小结170

第六章 神经变性疾病患者临床神经评估、样本保存和数据库建设171

第一节 神经变性疾病临床登记和数据库建立和实施171

一、临床研究目标的确立171

二、研究方案的确立172

三、组织机构的建立173

四、病例报告表（crf）的建立174

第二节 神经变性疾病患者血液、脑脊液组织样本的保存和处理177

一、血液及血液成分的处理和保存178

二、脑脊液的处理和保存179

三、标本dna的提取和保存180

附表6-1标本保存详细记录180

附表6-2关于使用组织样本开展科学研究的知情同意书181

第三节 神经心理认知障碍测试诊断系统182

一、医生端系统182

二、用户管理183

三、临床病例登记183

四、案例管理186

五、统计打印190

六、量表管理191

第七章 神经生物学常用分析及作图软件的应用193

第一节 image j神经生物分析软件的应用193

一、image j神经生物分析软件的基本功能193

二、image j神经生物分析软件分析免疫荧光定量技术197

第二节 graphpad prism 6.0作图和统计应用205

一、折线图205

二、直条图208

三、生存曲线图216

四、散点图219

五、饼图225

第三节 logistic回归、cox风险模型以及kaplan-meier曲线的统计应用231

一、logistic回归分析和roc工作曲线的制订231

二、cox回归分析238

三、kaplan-meier曲线分析242

第四节 endnote×7的应用245

一、文献管理245

二、论文撰写245