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目录3

上篇 生物化学与分子生物学实验方法与技术概论3

第1章 生物化学与分子生物学实验入门3

1.1 实验室规则3

1.2 实验报告写作规范4

1.3 常用生物化学与分子生物学仪器的使用5

1.4 实验误差与提高实验准确度的方法12

2.1 生物化学实验常用的生物材料15

第2章 生物化学实验方法与技术概述15

2.2 生物分子提取的一般原则16

2.3 生物化学分离、纯化和分析技术概述19

2.4 生物化学实验中常用的检测技术26

第3章 分子生物学实验方法与技术概述33

3.1 DNA分子克隆的基本原理33

3.2 用于基因克隆的工具酶34

3.3 分子克隆的载体与宿主系统40

3.4 DNA的克隆44

3.5 基因组文库的构建47

3.6 克隆基因的分离与鉴定51

3.7 聚合酶链式反应53

3.8 DNA的化学合成56

3.9 基因定位诱变57

3.10 DNA的序列测定59

3.11 RNA的测序60

第4章 生物化学与分子生物学实验的新技术简介62

4.1 生物芯片技术62

4.3 双向电泳技术63

4.2 毛细管电泳技术63

第5章 生物化学与分子生物学专业常用数据库简介65

5.1 生物化学与分子生物学专业部分因特网网址65

5.2 序列数据库65

5.3 生物信息资源导航系统和服务器66

5.4 国际上主要SRS数据库查询系统（序列查询系统）66

中篇 生物化学实验69

第6章 糖类69

实验1 总糖和还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸法69

实验2 血糖的定量测定——Folin—Wu法71

实验3 肝糖原的提取和鉴定74

实验4 黏多糖——肝素钠效价的测定76

实验5 直链淀粉和支链淀粉的测定——双波长法77

实验6 粗纤维的测定——酸性洗涤剂法79

第7章 脂质81

实验7 血清胆固醇的定量测定——磷硫铁法81

实验8 血清甘油三酯的测定83

实验9 植物叶片衰老过程中过氧化脂质含量的变化84

实验10 脂质组成对脂质单分子层通透性的影响86

实验11 氨基酸的纸上层析88

第8章 氨基酸和蛋白质88

实验12 蛋白质含量测定方法Ⅰ——双缩脲法90

实验13 蛋白质含量测定方法Ⅱ——Folin-酚法91

实验14 蛋白质含量测定方法Ⅲ——紫外吸收法93

实验15 蛋白质含量测定方法Ⅳ——考马斯亮蓝G-250染色法95

实验16 鸡血清蛋白质乙酸纤维素膜电泳97

实验17 蛋白质的两性性质及等电点的测定99

实验18 蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离101

实验19 酶的基本性质实验104

第9章 酶104

实验20 淀粉酶活性的测定108

实验21 硝酸还原酶活性的测定110

实验22 过氧化氢酶活性的测定——碘量法112

实验23 脲酶Km值测定114

第10章 维生素117

实验24 维生素A、维生素B1和维生素B2的定性测定117

实验25 维生素B2（核黄素）的定量测定——荧光法119

实验26 维生素C的定量测定——2,6-二氯酚靛酚滴定法121

第11章 核酸的性质、分离纯化与含量测定124

实验27 动物（脾）肝DNA的制备125

实验28 血液标本中DNA的提取127

实验29 小牛胸腺DNA的制备128

实验30 小牛胸腺DNA熔解温度（Tm）的测量131

实验31 动物肝RNA的制备——苯酚法133

实验32 酵母RNA的制备Ⅰ——浓盐法134

实验33 酵母RNA的制备Ⅱ——稀碱法136

实验34 植物组织中DNA的制备137

实验35 核酸的含量测定Ⅰ——紫外吸收法139

实验36 核酸的含量测定Ⅱ——定磷法141

实验37 二苯胺显色法测定DNA含量143

实验38 地衣酚法测定RNA含量144

实验39 DNA碱基成分分析及含量测定146

第12章 新陈代谢149

实验40 糖酵解中间产物的鉴定149

实验41 动物体肌糖原的酵解作用151

实验42 脂肪酸的β-氧化作用——酮体的生成及测定153

实验43 转氨基作用——转氨酶活性鉴定（薄层层析法）156

实验44 转氨基作用——血清谷丙转氨酶（SGPT）活性测定（King氏法）158

实验45 血清钙的测定160

实验46 果实中有机酸的提取与鉴定162

实验47 琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用163

实验48 生物氧化与电子传递165

第13章 综合性生物化学实验168

实验49 可溶性糖的硅胶G薄层层析168

实验50 离子交换柱层析分离核苷酸170

实验51 亲和层析法从鸡蛋清中分离溶菌酶174

实验52 蛋白质的盐析分级分离及凝胶层析脱盐177

实验53 凝胶层析法测定蛋白质的相对分子质量179

实验54 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量182

实验55 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点187

实验56 蛋白质双向电泳190

实验57 聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离过氧化物酶同工酶193

实验58 琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶195

实验59 细胞色素c的制备及其测定197

实验60 尼龙固定化木瓜蛋白酶200

实验61 发酵过程中无机磷的被利用和ATP的生物合成202

实验62 单向定量免疫电泳法——火箭电泳法203

实验63 酶联免疫吸附测定——ELISA205

实验64 蛋白质印迹——Western印迹207

下篇 分子生物学实验213

第14章 基础分子生物学实验213

实验65 碱裂解法提取质粒DNA213

实验66 质粒DNA的限制性核酸内切酶酶切216

实验67 琼脂糖凝胶电泳检测DNA218

实验68 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化221

实验69 低熔点琼脂糖法回收目的基因224

实验70 DNA的重组226

实验71 重组子的筛选与鉴定227

实验72 聚合酶链式反应技术体外扩增DNA229

实验73 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）233

实验74 脉冲电场凝胶电泳235

实验75 重组DNA序列在原核细胞中的表达237

实验76 外源蛋白质的诱导表达及SDS-PAGE电泳检测240

实验77 DNA的核苷酸序列分析242

实验78 DNA的分子杂交——Southern印迹244

实验79 RNA的分子杂交——Northern印迹247

第15章 综合性分子生物学实验251

实验80 组织细胞中mRNA的提取与纯化251

实验81 利用PCR技术差异显示特异的mRNA254

实验82 植物基因的转化258

实验83 构建cDNA文库的基础实验261

实验84 脱氧核糖核酸酶Ⅰ足迹分析266

实验85 凝胶阻滞实验Ⅰ——DNA-蛋白质滞后电泳分析268

实验86 凝胶阻滞实验Ⅱ——甲基化干扰实验271

实验87 凝胶阻滞实验Ⅲ——尿嘧啶干扰实验274

实验88 酵母双杂交系统实验Ⅰ——质粒DNA转化酵母细胞275

实验89 酵母双杂交系统实验Ⅱ——β-半乳糖苷酶活性测定278

实验90 酵母双杂交系统实验Ⅲ——蛋白质相互作用的测定280

附录283

附录1 纯水的制备和检验283

附录2 常用溶液和试剂的配制283

附录3 常用化学试剂的各种参数表285

附录4 生物细胞内的缓冲系统与缓冲液的配制287

附录5 细菌培养基、抗生素298

附录6 部分生化物质电泳染色方法简介301

附录7 部分试剂与溶剂的纯化306

附录8 常用核酸和蛋白质的数据换算307

附录9 硫酸铵饱和度计算表308

附录10 常用蛋白质相对分子质量标准参照物311

附录11 20种组成蛋白质的氨基酸的生物化学性质311

附录12 某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数314

附录13 离心机转速（r/min）与相对离心力（RCF）的换算315

附录14 生物化学与分子生物学中部分常见英文缩写316

附录15 有关的警告标志图320

附录参考书目321