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第1章　抗原1

1.1　抗原的特性1

1.1.1　抗原的免疫原性1

1.1.2　抗原的免疫反应性3

1.2　抗原决定簇3

1.3　半抗原和载体效应5

1.4　抗原的分类8

1.5　抗原特异性和免疫原性的分子基础9

1.6　免疫佐剂10

1.6.1　佐剂的分类10

1.6.2　佐剂的生物学作用11

第2章　抗体12

2.1　抗体生成的理论——克隆选择学说13

2.2　抗体的分子结构与功能13

2.2.1　抗体分子的基本结构14

2.2.2　可变区和恒定区20

2.2.3　抗体的其他成分21

2.2.4　抗体分子的功能区22

2.2.5　抗体分子的酶切片段24

2.2.6　抗体的生物学功能25

2.3　特异性免疫应答过程28

2.3.2　特异性免疫应答的阶段29

2.3.1　特异性免疫应答的特点29

2.4　免疫球蛋白的基因及其表达30

2.4.1　免疫球蛋白基因的结构32

2.4.2　免疫球蛋白基因的重排34

2.4.3　免疫球蛋白基因表达的调节40

2.4.4　免疫球蛋白的多样性41

2.5　抗原与抗体的相互作用42

2.6 三代抗体简介44

2.6.1　第一代抗体：多克隆抗体44

2.6.2　第二代抗体：单克隆抗体45

2.6.3　第三代抗体：基因工程抗体45

2.7.1　原理46

2.7　免疫血清的制备46

2.7.2　抗原的制备47

2.7.3　佐剂的应用50

2.7.4　动物免疫51

第3章　单克隆抗体55

3.1 引言55

3.2　杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理55

3.3　杂交瘤细胞的筛选原理58

3.4　融合用细胞的制备59

3.4.1　免疫动物59

3.4.2　骨髓瘤细胞的复苏和培养60

3.4.4　血清的选择61

3.4.3　饲养细胞的培养61

3.5　细胞融合62

3.5.1　制备饲养细胞层62

3.5.2　制备骨髓瘤细胞悬液62

3.5.3　制备免疫脾细胞悬液63

3.5.4　细胞融合63

3.6　杂交瘤细胞的选择培养64

3.7　特异性抗体的检测64

3.7.1 酶联免疫吸附测定——间接ELISA法65

3.7.2　标记SPA间接ELISA法66

3.7.3　亲和素-生物素ELISA（ABC-ELISA）法66

3.7.4　其他方法67

3.8　杂交瘤细胞的克隆化68

3.8.1　有限稀释法68

3.8.2　半固体琼脂平皿培养法69

3.8.3　单细胞显微镜操作法69

3.9　杂交瘤细胞的冻存70

3.10　杂交瘤细胞株染色体检测70

3.11　单克隆抗体的大量制备72

3.11.1　动物体内诱生单克隆抗体法72

3.11.2　体外培养产生单克隆抗体法72

3.12.3 蛋白A-琼脂糖珠亲和层析法或蛋白G琼脂糖珠亲和层析法73

3.12.2　免疫吸附层析法73

3.12.1　硫酸铵沉淀法或正辛酸-硫酸铵沉淀法73

3.12　单克隆抗体的纯化73

3.12.4　DEAE离子交换层析法74

3.13　单克隆抗体的保存74

3.14　单克隆抗体Ig类型的鉴定75

3.15　杂交瘤细胞及单克隆抗体的其他性质鉴定75

3.15.1　杂交瘤细胞的其他性质鉴定75

3.15.2　单克隆抗体的其他性质鉴定75

3.16　淋巴细胞杂交瘤技术的优缺点76

3.16.1　优点76

3.16.2 缺点77

3.16.3　用细胞工程制备人单克隆抗体的局限性78

第4章　基因工程抗体79

4.1　引言79

4.1.1　单抗的局限性和基因工程抗体的出现79

4.1.2　基因工程抗体的分类79

4.2　组合抗体库83

4.3　噬菌体展示抗体库84

4.3.1　原理84

4.3.2　构建87

4.3.3　抗体库的富集、筛选98

4.4　核糖体展示抗体库103

5.1.2　抗体的预处理105

5.1.1　引言105

第5章　抗体的处理105

5.1　抗体的纯化105

5.1.3　盐析法106

5.1.4　正辛酸－饱和硫酸铵纯化法108

5.1.5　亲和层析法109

5.1.6　优球蛋白纯化法110

5.1.7　凝胶过滤法111

5.1.8　离子交换层析114

5.1.9　疏水层析115

5.1.10　高效液相色谱115

5.2　抗体的保存116

5.1.11 固定化金属亲和色谱116

5.3　抗体的理化性质鉴定117

5.3.1　蛋白含量的计算117

5.3.2　相对分子质量及纯度测定121

5.3.3　等电点的测定124

5.3.4　亲和力的测定126

5.4　抗体的标记128

5.4.1　放射性同位素标记技术129

5.4.2　荧光素色素标记技术129

5.4.3　酶标记技术131

5.4.4　生物素标记技术133

5.4.5　胶体金标记技术135

第6章　抗体在体外检测中的应用139

6.1　放射免疫分析139

6.1.1　基本原理139

6.1.2　检测方法140

6.2　免疫放射分析141

6.2.1　免疫放射分析原理141

6.2.2　检测方法142

6.2.3　免疫放射分析技术特点142

6.3　酶免疫分析143

6.3.1　均相EIA144

6.3.2　非均相EIA147

6.4　荧光免疫分析153

6.4.1　荧光免疫染色法155

6.4.2　荧光免疫分析157

6.5　化学发光免疫分析158

6.6　免疫染色161

6.6.1　免疫染色的原理161

6.6.2　培养细胞的免疫染色方法163

6.6.3　组织切片的免疫染色方法164

6.6.4　细胞涂片165

6.6.5　Western blotting膜上蛋白质的免疫染色方法166

6.6.6　免疫染色的注意事项166

6.7.1　免疫-PCR（IM-PCR）167

6.7　免疫-PCR和PCR-免疫167

6.7.2　PCR-免疫171

6.7.3　注意事项172

6.8　抗体芯片技术173

6.9　免疫胶体金的制备和应用175

6.9.1　免疫胶体金技术的基本原理175

6.9.2　胶体金和免疫胶体金的制备方法175

6.9.3　免疫胶体金的应用176

6.10　免疫层析快速诊断技术179

6.10.1　免疫胶体金快速诊断技术的原理179

6.10.2　免疫胶体金快速诊断技术的优点181

6.10.3　免疫胶体金快速诊断技术的应用现况182

6.11　基于抗体的细胞分离技术183

6.11.1　免疫盘化法183

6.11.2　免疫磁珠法183

6.11.3　荧光激活的细胞分选法188

6.12　免疫沉淀法197

6.12.1　靶蛋白的放射性标记197

6.12.2　裂解细胞198

6.12.3　特异性免疫复合物的形成及收集198

6.12.4　放射性标记蛋白质的放射自显影分析199

6.13　免疫印迹199

6.13.1　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳199

6.13.2　免疫印迹203

6.14　免疫亲和层析技术207

6.14.1　免疫亲和层析的基本过程208

6.14.2　抗体和载体的选择208

6.14.3　操作步骤213

6.14.4　影响免疫亲和层析纯化效果的因素214

6.15　免疫电镜技术216

6.15.1　透射电镜样品的制备217

6.15.2　免疫电镜标记物219

6.15.3　免疫电镜中的分子桥技术221

6.15.4　免疫标记程序223

6.15.5　对照实验224

6.15.6　扫描电镜及冷冻蚀刻免疫电镜225

第7章　抗体药物在定向治疗中的应用229

7.1　引言229

7.2　抗体药物的治疗机理230

7.3 抗体药物治疗中存在的问题230

7.4　单抗靶向药物的发展趋势231

7.5　单克隆抗体与化疗药物联合用药治疗肿瘤的特点232

7.6　重组免疫毒素在癌症治疗中的应用232

7.7　免疫脂质体在定向治疗中的应用234

7.7.1　免疫脂质体的优越性235

7.7.2　免疫脂质体的种类236

7.7.3　免疫脂质体在应用中存在的问题237

参考文献239