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细胞培养概述1

一、细胞培养发展简史1

二、细胞培养的基本概念4

三、细胞培养的基本要求5

实验一 实验器材的清洗、包装和消毒8

一、常用的实例器材9

二、清洗10

三、包装13

四、消毒13

实验二 实验室常用的仪器设备21

一、净化台21

二、自动双重纯水蒸馏器22

三、抽气泵24

四、压力蒸汽消毒器25

五、电热恒温培养箱26

六、电热恒温干燥箱26

七、液氮生物容器26

八、CO2培养箱27

九、冰箱28

实验三 动物细胞培养用液30

一、蒸馏水的制备31

二、平衡盐溶液（balanced salt solution,BSS）的配制32

三、天然培养基33

四、合成培养基36

五、血清细胞培养基44

六、无血清细胞培养基44

七、消化液49

八、pH调整液52

九、200毫摩尔/升L-谷氨酰胺52

十、抗菌素液52

十一、细胞用液的分装方法和要求53

实验四 细胞原代培养56

一、乳鼠肺组织培养程序57

二、原代细胞培养操作要领60

三、原代细胞培养注意事项61

四、原代细胞培养的取材62

五、原代细胞培养方法66

实验五 培养细胞的观察74

一、培养细胞的分型75

二、细胞培养中常用术语76

三、培养细胞一代生长过程78

四、细胞周期82

五、培养细胞的生命期84

实验六 培养细胞常规检查和生物学检测88

一、培养细胞常规检查88

二、培养细胞生物学检查和鉴定94

实验七 细胞传代培养99

一、细胞传代方法100

二、乳鼠原代肺细胞培养物传代100

三、盖玻片条细胞培养法102

四、培养细胞活力的测定103

五、培养细胞Giemsa染色法103

实验八 细胞冻存、复苏、运输和短期保存107

一、影响冻存细胞活性的因素108

二、细胞冻存方法109

三、组织细胞短期保存方法111

四、细胞复苏方法112

五、细胞运输112

实验九 细胞的分离和纯化114

一、成纤维型细胞的分离和去除114

二、骨髓和外周血有核细胞的纯化117

三、肿瘤细胞的纯化119

四、单核细胞和巨噬细胞的纯化122

五、上皮细胞的纯化122

六、细胞移速分离纯化123

一、克隆形成实验124

实验十 培养细胞活力检测方法124

二、梁料排斥试验130

三、四唑盐（MTT）比色法131

实验十一 细胞形态学研究方法133

一、培养细胞的固定133

二、细胞梁色法135

三、培养细胞透射电镜样品的制备146

四、培养细胞扫描电镜样品的制备148

实验十二 细胞遗传学的检测方法149

一、细胞DNA含量测定149

二、细胞DNA合成测定151

三、人外周血淋巴细胞染色体标本制备155

四、培养细胞染体标本制备156

五、染色体G显带157

六、姐妹染色单体区分（sister chromatid differentiation,SCD）染色法163

七、染色体核仁组成区的银染技术165

实验十三 恶性肿瘤细胞侵袭的实验研究方法168

一、动物体内瘤细胞侵袭模型168

二、体外瘤细胞侵袭模型172

三、转移性瘤细胞筛选试验177

实验十四 显微镜的光学部件和显微照相操作180

一、显微镜光学构造180

二、滤光镜的选择186

三、显微照相操作前的准备188

四、Olympus PM-10 AD型全自动黑白显微照相操作程序191

五、黑白照片影像不佳及其纠正措施193

六、彩色显微摄影操作程序195

七、彩色照片影像不佳及其纠正措施196

八、黑白胶片的冲洗和放大197

实验十五 相差显微镜202

一、相差显微镜构造特点202

二、相差显微镜检原理203

三、重光XSZ-D2型相差显微镜摄影程序204

四、Olympus CK2型相差显微镜摄影程序205

实验十六 荧光显微镜206

一、荧光显微镜构造特点206

二、荧光显微术样品制作要求209

三、荧光显微镜摄影操作程序209

四、荧光显微镜摄影注意事项210

附录 国内外著名细胞库和已建立的细胞系（或株）213

参考文献247