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第一篇 植物制片技术2

第一章 植物制片的目的和方法概述2

第一节 植物制片的目的、类型和方法2

第二节 植物制片的一般流程3

一、一般制片的步骤4

二、石蜡制片的主要步骤4

三、半薄切片的主要步骤5

第三节 常用仪器、用具、药品5

一、常用仪器5

二、常用实验用具6

三、常用文具6

四、药品及染料的规格6

第四节 制片前的准备工作7

一、玻璃器皿的清洁7

二、实验计划、制片日程表8

第二章 石蜡制片法9

第一节 材料的选择与分割9

一、取样9

二、植物器官的分割10

三、染色体制片取样11

第二节 固定与保存11

一、固定的原理和方法12

二、固定液13

三、固定操作步骤15

四、材料的冲洗15

五、固定时需要注意的问题16

六、常用器具17

第三节 脱水17

一、脱水的目的18

二、常用的脱水剂及脱水与复水方法18

三、脱水时注意事项18

第四节 透明19

一、透明的目的19

二、常用的透明剂19

三、透明的方法19

第五节 浸蜡20

一、浸蜡的目的20

二、浸蜡方法和步骤20

第六节 包埋21

一、包埋剂21

二、石蜡的种类21

三、石蜡的选择22

四、各级石蜡的配制与包埋前的准备22

五、包埋方法23

第七节 切片24

一、切片机、切片刀种类及应用25

二、切片机的组成与使用25

三、切片刀的准备26

四、蜡块的分割、修整与固着27

五、切片方法与步骤27

六、石蜡切片过程易出现的问题及解决的办法27

第八节 展片与粘片28

一、展片、粘片28

二、常用粘贴剂及其配制29

三、展片、粘片方法及注意事项30

第九节 脱蜡与透明30

一、脱蜡与透明30

二、石蜡制片中常用的脱蜡剂与透明剂31

三、脱蜡方法31

第十节 染料与染色31

一、染色的目的31

二、染料的分类31

三、几种常用染料的性质及配制32

四、染色原理简介36

五、一般的染色方法36

六、染色注意事项37

第十一节 封藏39

一、封藏的目的39

二、封藏剂种类39

三、封藏方法39

第三章 石蜡制片实例40

一、根尖纵切片制片法40

二、茎的纵、横切片制片法41

三、叶横切片制片法43

四、花芽纵切片制片法44

五、子房纵切片制片法45

六、花生子叶横切片制片法47

七、线粒体制片法——雷加特氏法47

第四章 其他切片法49

第一节 徒手切片法49

一、徒手切片概述49

二、徒手切片实例49

第二节 冰冻切片法50

一、冰冻切片概述50

二、冰冻切片机50

三、冰冻切片方法51

四、冰冻切片注意事项51

第三节 滑走切片法51

一、滑走切片法概述51

二、滑走切片机组成与使用52

三、滑走切片法研究木材结构注意事项52

四、滑走切片实例54

第五章 非切片制片法56

第一节 压片、涂片制片法56

一、压片、涂片制片方法及在植物学研究中的应用56

二、压片制片法56

三、涂片制片法58

第二节 整体制片法59

一、整体透明法60

二、蚕豆叶或鸭跖草叶表皮制片62

三、小麦叶表皮制片62

四、棉胚乳整体制片63

第三节 离析法64

一、木材解离制片64

二、胚囊酶法分离技术65

第六章 半薄切片、超薄切片与扫描电镜样品制备67

第一节 半薄切片和超薄切片法常用试剂67

一、几种常用固定液的配制67

二、脱水剂69

三、渗透剂69

四、包埋剂69

五、常用染料71

第二节 半薄切片制样方法73

一、半薄切片方法简介73

二、半薄切片制样步骤73

三、半薄切片法在植物学研究中的应用77

第三节 超薄切片制样方法78

一、超薄切片制样步骤79

二、超薄切片法在植物学研究中的应用84

第四节 扫描电子显微镜样品的制备85

一、整体样品表面结构观察的制样方法85

二、扫描电子显微镜制样中的关键步骤86

三、扫描电子显微镜在植物学研究中的应用89

第五节 冷冻超薄切片制样方法简介90

一、冷冻超薄切片原理90

二、冷冻超薄切片方法90

三、低温包埋技术92

四、冷冻超薄切片在植物学研究中的应用94

第七章 原位杂交与组织化学95

第一节 原位杂交技术95

一、植物染色体原位杂交技术95

二、RNA原位杂交技术100

第二节 组织切片原位PCR104

一、原位PCR技术的基本原理104

二、基本类型104

三、原位PCR基本步骤105

第三节 植物组织化学106

一、核酸的测定106

二、细胞内含物的测定107

三、细胞壁物质的测定109

第四节 GUS及荧光检测110

一、GUS组织化学染色110

二、免疫组织化学检测111

三、非免疫荧光标记111

第二篇 显微镜与显微摄影技术114

第八章 显微镜114

第一节 显微镜基本知识114

一、显微镜的种类114

二、透镜成像的基本知识115

三、光路简介116

四、复式显微镜结构原理116

五、显微镜的参数117

第二节 显微镜的结构和性能120

一、光学系统120

二、机械部件123

三、推进器和显微测微尺125

四、显微镜的保养127

五、显微镜的维护128

第三节 几种常用显微镜简介131

一、复式显微镜的原理、结构与使用131

二、体视显微镜的原理、结构与使用135

三、荧光显微镜的原理、结构与使用141

四、倒置显微镜的原理、结构与使用147

五、激光共聚焦显微镜简介150

六、电子显微镜的原理、结构与使用150

第四节 几种显微技术的应用156

一、荧光显微术157

二、相差显微术159

三、微分干涉术161

四、偏光显微术164

五、暗视野显微术166

第九章 显微摄影成像装置168

第一节 摄影和照相机的发展历史168

一、摄影术的含义和发明168

二、照相机的发明和发展169

第二节 照相机的类型和结构170

一、照相机的类型170

二、照相机的主要结构172

第三节 照相机的使用方法174

一、曝光和曝光量174

二、调焦175

三、控制景深176

四、控制清晰度176

五、数码相机简介177

六、CCD相机简介183

第十章 显微摄影技术184

第一节 显微摄影技术概论184

一、图像采集184

二、图像存储184

三、图像处理185

四、图像转换185

五、显微成像技术的展望185

第二节 近距离摄影185

一、构图186

二、测光、曝光186

三、表现力186

四、近距离拍摄实例186

五、消费型相机佳能Power ShotProl结构功能简介187

第三节 小物体（微距）摄影188

一、正确操控相机188

二、微距拍摄实例190

三、专业数码单反相机NikonD200结构功能简介191

第四节 超微距摄影（解剖镜摄影）194

一、超微距摄影装置194

二、超微距摄影实例195

第五节 高倍率显微摄影（显微镜摄影）197

一、高倍率显微摄影装置197

二、高倍率显微摄影实例198

第六节 获得高质量显微图像与常见拍摄问题分析199

一、相机握持的方式200

二、如何判别一张模糊的图像201

三、显微摄影采用的器材201

四、如何虚化背景、突出主体202

五、如何在暗弱光线下不使用闪光灯进行拍照202

六、怎样合理使用曝光补偿202

七、如何微距拍摄具有大面积绿色叶片背景的小花203

八、怎样正确使用相机的白平衡203

九、解剖镜下（超微距）摄影如何调光203

十、高倍率显微摄影如何正确调焦203

十一、Photoshop软件后期处理时如何适度锐化204

十二、Photoshop软件后期处理时如何去除数码图像阴霾204

第十一章 显微图像分析处理205

第一节 显微图像处理205

一、显微图像获得的几种方式205

二、图像存储格式205

三、图像处理方法206

四、图像输出方式208

五、发表文章电子图版的基本要求208

第二节 专业显微图像处理分析软件208

一、SimplePCI软件208

二、Image-Pro Plus（IPP）软件209

三、MetaMorph（MM）软件211

四、Cytogenetics细胞遗传学工作站212

五、两款免费的专业显微图像分析软件212

六、显微图像分析对硬件的基本要求213

第三篇 植物显微技术实验指导216

实验一 石蜡制片法（一）216

一、实验目的与原理216

二、实验材料216

三、实验试剂及用具216

四、操作步骤216

五、实验效果218

实验二 石蜡制片法（二）219

一、实验目的与原理219

二、实验材料219

三、实验试剂及用具219

四、包埋的操作步骤219

五、包埋的效果221

实验三 石蜡制片法（三）222

一、实验目的与原理222

二、实验材料222

三、实验试剂及用具222

四、操作步骤222

五、实验结果分析224

实验四 石蜡制片法（四）225

一、实验目的与原理225

二、实验材料225

三、实验试剂及用具225

四、操作步骤225

五、实验结果分析227

实验五 半薄切片法228

一、实验目的与原理228

二、实验材料228

三、实验试剂及用具228

四、操作步骤228

实验六 超薄切片法232

一、实验目的与原理232

二、实验材料232

三、实验试剂及用具232

四、操作步骤232

五、实验结果233

实验七 冰冻切片法234

一、实验目的与原理234

二、实验材料234

三、实验试剂及用具234

四、操作步骤234

五、冰冻切片实例：拟南芥花序轴横切片235

六、冰冻切片法中影响样品形态的问题原因及解决方法236

实验八 原位杂交技术237

一、实验目的与原理237

二、实验材料237

三、实验试剂及用具237

四、操作步骤237

五、实验结果240

实验九 显微镜和显微摄影（一）241

一、实验目的与原理241

二、实验材料241

三、实验仪器241

四、操作步骤241

实验十 显微镜和显微摄影（二）245

一、实验目的与原理245

二、实验材料245

三、实验仪器245

四、操作步骤245

实验十一 显微图像分析处理的基本方法249

一、实验目的与原理249

二、实验材料249

三、实验仪器249

四、操作步骤249

附录1几种常用的固定液251

附录2几种常用的脱水剂及脱水方法253

附录3几种常用的透明剂及透明方法253

附录4几种常用的粘贴剂、封藏剂与包埋剂254

一、粘贴剂254

二、封藏剂254

三、包埋剂254

附录5几种缓冲液的配制255

一、原位杂交用缓冲液的配制255

二、半薄切片用缓冲液的配制255

附录6几种常用染料的性质及配制256

一、染料256

二、常用染料染色对象256

主要参考文献258